Аналіз крові на АНФ: що це таке, розшифровка, які дані показує

Імунна система людини – унікальний злагоджений механізм, здатний реагувати на будь-які зовнішні впровадження патогенних факторів, тим самим захищаючи організм від цілого ряду захворювань. Але як відомо, з кожного правила є винятки, і в даному випадку вони виглядають як реагування імунітету на власні клітини, що отримало назву аутоімунні хвороби.

При даних патологіях йде вироблення антитіл, що атакують здорові клітини, вражаючи або знищуючи їх. В результаті відбувається порушення функціонування окремих тканинних структур і навіть органів. Такі патології з-за своєю поширеності і залученості в процес декількох органів або систем отримали назву системних захворювань.

При появі сучасних методів лабораторної діагностики, одним з яких є АНФ аналіз крові на пошук антинуклеарного фактора, що дозволяє виявити антинуклеарні (антиядерні) антитіла і визначити причину патології. Даний показник є одним з маркерів системних захворювань сполучної тканини (СЗСТ), прийнятим як «золотий стандарт» даного виду досліджень.

Основні поняття, що характеризують СЗСТ

Як вже описувалося вище, патогенез даних патологій бере свій початок з збоїв функціоналу імунної системи, і вироблення захисних антитіл до певних компонентів власних клітин. Такі клітки за особливість свого походження мають другу назву – аутоантитіла. У процесі імунної збою вони вступають в контакт з білковими сполуками ядра, нуклеїновими кислотами та антигенами цитоплазми, що призводить до появи симптомів запальних захворювань, таких як:

  • структурні зміни тканин та органів;
  • виражене необґрунтоване стомлення;
  • больові відчуття в м’язах і суглобах;
  • поразка шкірних покривів;
  • зниження ваги тіла та інші.

Антинуклеарні антитіла (АНА) можуть утворюватися при досить великому спектрі аутоімунних патологій, але найбільша вірогідність їх появи при системному червоному вовчаку (ВКВ).



АНФ необхідно здати при ознаках тривалого запального процесу

Довідка! За статистикою, більш ніж у 90% пацієнтів, які страждають на СЗСТ, визначається патологічна вироблення таких антитіл. На поточний момент вивчено близько 200 їх видів, які отримали узагальнену назву – антинуклеарный фактор. В основному вони представлені імуноглобулінами класу G, але іноді зустрічаються М або А.

Читайте також:  Знижені нейтрофіли в крові: що це означає, чому бувають знижені в аналізі

Суть аналізу крові на антинуклеарный фактор

Перш ніж заглиблюватися в особливості проведення дослідження на АНФ, варто зазначити, що методика була винайдена і почала застосовуватися досить давно – в 60-х роках минулого століття. Але широке поширення в діагностичній практиці отримала лише на початку 80-х років XX століття після вдосконалення. В якості субстрату ще в 1961 році вчений Beck застосовував клітини лабораторних тварин, і тільки в 1982 році Tan скористався перещеплюваної клітинною лінією людини HEp-2 для пошуку АНФ.

Хоча основна мета даного тесту – це встановлення діагнозу червоний вовчак, все ж він вважається універсальною методикою і для інших колагенозів (СЗСТ). До останніх відносяться:

  • склеродермія;
  • дерматоміозит;
  • вузликовий періартеріїт;
  • хронічний активний гепатит і т. д.

Однією з найбільш зручних, і тому найчастіше використовуваних методик для визначення в крові пацієнтів антинуклеарного фактора, вважається непряма иммунофлюорестенция. Дослідження проводиться при нанесенні сироватки крові на клітини перещеплюваної эпителиоидной лінії аденокарциноми гортані людини НЕр-2 (містять певний ряд ядерних антигенів) із застосуванням міченого коньюгата (з’єднання) з антитілами.

Цей вибір зроблено не випадково – клітини НЕр-2 – дуже зручний субстрат для вивчення біоматеріалу. Вони мають досить великі ядра, і при висадці на лабораторних стеклах ростуть одношарово. В якості субстрату можна використовувати і інші клітинні лінії людини, але вдала морфологія і культивування однозначно робить саме НЕр-2 – незамінним матеріалом.

У ході діагностики при інкубації сироватки обстежуваного з клітинним субстратом, при наявності АНА відбувається їх з’єднання з відповідними нуклеарными антигенами. Місця зв’язки АНФ з НЕр-2 визначаються при використанні міченого флюоресцеїном (барвником) коньюгата. Для виконання оцінки результатів сталися реакцій застосовується люмінесцентний мікроскоп, що дозволяє диференціювати характер і ступінь одержані зв’язок.



Люмінесцентний мікроскоп для лабораторних досліджень АНФ

Довідка! HEp-2 людини, на відміну від тканинних криосрезов тварин, мають більш високу швидкість ділення клітин, що дає змогу виявити антитіла до антигенів, які експресуються лише при діленні. Також в субстраті людини відсутня клітинний матрикс, що знижує якість візуалізації досліджуваного світіння.

Які групи антигенів використовуються при дослідженні?

При розшифровці матеріалів завжди необхідно брати до уваги, що в спектр АНА входить досить велика група аутоантитіл до нуклеопротеидам, рибонуклеопротеидам, гістонам, ДНК та іншим структурним одиницям ядра. З цього випливає, що функціонал тесту спрямований на виявлення антитіл до компонентів ядра і цитоплазми, які спочатку були визначені при СЧВ.

Читайте також:  Аланінамінотрансфераза: як здати аналіз крові, розшифровка

Пізніше діагностичні можливості дослідження були розширені, що обумовлено визначенням таких антитіл при інших СЗСТ. У скринінгових методик для виявлення сумарних АНА, як правило, застосовується певний набір антигенів, прийнятих за основні маркери аутоімунних ЗВТ.

До них належать антитіла класу IgG:

  • SS-A (Ro) – ядерні рибонуклеопротеины;
  • SS-B (La) – ядерні білки;
  • Scl-70 – білок-фермент (топоізомераза-1);
  • нативна двухцепочная ДНК;
  • RNP/Sm – комплекс антигенів;
  • Jo-1 – фермент РНК – синтетаза;
  • CENP-B (центромера)
  • Hep-2 клітини;
  • мітохондрії (PDC).

АНА практично нешкідливі для організму – вони не здатні проникати в живі тканини. Але в окремих випадках можуть з’єднуватися у комплекси антиген-антитіло, що в результаті призводить до структурних руйнуванням тканин. Одним з таких прикладів є ураження паренхіми нирок при СЧВ. Так як при СЗСТ в процес втягнуто кілька органів, то виявлення АНА не є першочергово важливим для діагностики, а вважається лише підтвердженням певної симптоматики.



Можливості аналізу АНФ, виражені у процентному співвідношенні

Вивчення отриманих результатів

Після проведення всіх необхідних процедур – взяття біоматеріалу і його підготовці до лабораторної дослідження, проводиться оцінка та інтерпретація результатів. Сюди входить визначення титру (концентрації) антитіл і типу світіння. Значущим параметром для діагностики є показник концентрації понад 1:160. Наприклад, при загостренні ревматизму він може перевищувати позначку 1:640, тоді як в ремиссионном періоді спостерігається зниження до 1:160-1:320.

Тип світіння показує мішені АНА, що є особливо важливим клінічним моментом, напрямних наступні дії лікаря в призначенні діагностичних заходів. За характером світіння ядер при використанні НЕр-2 визначиться понад 20 варіантів ядерного фарбування, залежно від видів присутніх антитіл в біоматериалі. До основних з них відносяться наступні типи світіння.

  • Периферичний. Світіння свідчить про наявність анти-ДНК-антитіл, що підтверджує ВКВ. Основним видом антигенів для периферичного типу є гистоновые білки і ДНК.
  • Дифузне (гомогенне). Таке свічення спостерігається при СЧВ, що супроводжується ураженням структури нирок і схожих ЗВТ, нефриті, склеродермії, а також лікарсько-індукованої ВКВ. Антигени при даному типі представлені дсДНК, гистонатами і нуклеосомами.
  • Ядрышковое (нуклеарное). Цей тип характерний для системної форми склеродермії, і визначається за присутності у пацієнтів антитіл – РНК полімераза 1, PM/Scl, NOR, U3RNP.
  • Цитоплазматическое. Подібний тип підсвічування вказує на наявність АНА до тРНК–синтетазам, а саме Jo-1, і спостерігається при полимиозите.
  • Гранулярное. Визначається при синдромі Шегрена, інфекційному мононуклеозі, змішаному ЗВТ (Sharp-синдром, MCTD) і лікарський вовчакового синдрому. Переважно присутні антигени для цього типу – SS-A, SS-B, Sm, U1-RNP, і PCNA.
  • Крупногранулярное. Характерно для змішаних ЗВТ і, на думку багатьох вчених, пов’язана з наявністю антигену RNP.
  • Мелкогранулярное. Визначається присутність антитіл, що утворюються проти рибонуклеїнових білків – АЅЅР (АЦЦП), SS-A, SS-B та інших. Такі антитіла характерні для СЧВ, також її специфічних шкірних формах, ревматоїдному артриті, склеродермії, полимиозите, синдромі Шегрена.
  • Центромерное. Даний тип в основному відзначається при склеродермії. Хоча в одному зразку крові, особливо у обстежуваних з дифузними ЗВТ, у відокремленій плазмі можуть визначатися антитіла до різних ядерних компонентів.
  • Точкові вкраплення в ядрі. Цей тип переважно виявляється при хворобах печінки аутоімунного характеру. При ньому можуть поєднуватися кілька флюоресцентних типів, наприклад, ядрышковый і мелкогранулярный, що обумовлено антитілами до Scl-70.
Довідка! Відмічено, що при збільшенні розведення плазмового біоматеріалу параметри світіння можуть видозмінюватися, так як для багатьох антитіл характерна зміна активності при різного ступеня концентрації.

Фактори, здатні спотворити результати

На достовірність отриманих у ході дослідження даних можуть вплинути всього кілька факторів, здатних показати і хибнопозитивних і псевдонегативний результат. Так, неправдоподібні відповіді зі зсувом вгору спостерігаються у літніх пацієнтів віком від 60 років (за статистикою в 10-37% випадках) і при прийомі медпрепаратів, що викликають лікарську вовчак (деякі антибіотики, контрацептиви, сульфаніламіди, тіазидні діуретики).

Читайте також:  Сироваткове залізо: як здавати аналіз крові і розшифровка

Відзначено, що у 5-55% осіб жіночої статі, які мають грудні імплантати, підвищується рівень концентрації АНА. До помилкової діагностики со сдвигом вниз може призвести вживання глюкокортикоїдних препаратів – Преднізолону, Метипреда або Дексаметазону.

Відео по темі: